孫建濤 薛素強 潘金金 張青林
（廣州市華南農大生物藥品有限公司 技術(shù)服務(wù)部）
伴隨家禽養殖規模不斷擴大、集約化程度越來(lái)越高帶來(lái)的結果就是家禽活動(dòng)空間的相對減少以及環(huán)境性致病菌危害越來(lái)越大。當前環(huán)境中的條件性致病菌的危害已經(jīng)成為家禽養殖業(yè)不可忽視的重要一部分。而沙門(mén)氏菌作為一種常見(jiàn)致病菌, 其既可通過(guò)垂直傳播感染也可通過(guò)污染的飼料、器具、飲水等進(jìn)行水平傳播，其帶來(lái)的危害越來(lái)越嚴重。筆者在臨床中遇到1例由沙門(mén)氏菌引發(fā)的黃羽肉雞60天齡感染發(fā)病的病例, 現報道如下：
2015年3月16日，廣東江門(mén)地區一養殖戶(hù)在林中飼養的20000 只三黃雞發(fā)生以精神沉郁、食欲減退、腹瀉、消瘦和零星死亡為主要癥狀的疾病，至3月20日已死亡200只。該群肉雞1-3日齡，投喂開(kāi)口藥鹽酸環(huán)丙沙星飲水；5日齡免疫新支二聯(lián)弱毒苗和新支流滅活油乳苗；10日齡法氏囊飲水；12日齡免疫H5（Re-6+Re-7）滅活油乳苗；25日齡免疫H5（Re-6+Re-7）滅活油乳苗和新流二聯(lián)滅活油乳苗；60日齡免疫H5（Re-6+Re-7）滅活油乳苗。雞群開(kāi)始發(fā)病時(shí)采用硫酸新霉素+強力霉素進(jìn)行治療，無(wú)明顯效果；截止就診時(shí)，雞群病程約4d，死亡200余只。養殖戶(hù)使用常用的多種抗生素效果微乎其微，病情無(wú)法控制，遂進(jìn)行診治。
1.臨床表現：病雞發(fā)病日齡60d，病雞精神沉郁，采食量減退，消瘦，胸骨彎曲，行動(dòng)遲緩，癱瘓，雙翅下垂，縮頭閉目，羽毛松亂，嚴重腹瀉，起初排黃白色糊狀糞便，繼而排水樣稀糞，肛門(mén)周?chē)患S便污染，呈綠色糊狀污穢，后期多因因衰竭而死亡。
2.剖檢變化：剖檢病死雞30 只，病雞心冠有出血斑點(diǎn)、表面有大量白色結節，肝臟腫大、褪色，質(zhì)脆易碎，偶見(jiàn)菜花樣大壞死灶區，少數病例肝臟破裂，腹腔積有血塊，脾臟腫大、有壞死結節呈斑駁狀，肌胃表面有白色結節，腎臟淤血，腸道黏膜出血，有的腸黏膜脫落。
3.實(shí)驗室診斷
3.1 細菌分離培養：無(wú)菌采集病雞肝臟，用接種環(huán)劃線(xiàn)于SS瓊脂培養基表面，置37oC溫箱培養24h，培養基表面長(cháng)出無(wú)色半透明，中心黑色或幾乎全部黑色的菌苔，該生長(cháng)特性與沙門(mén)氏菌的培養特性基本一致。然后再挑取單個(gè)菌落作進(jìn)一步純化培養，取純化培養菌進(jìn)行革蘭氏染色, 挑取少許菌落在玻片上用生理鹽水稀釋?zhuān)瑢⑼科诨鹧嫔瞎潭ǎ渭咏Y晶紫染色液染1min，水洗；滴加革蘭氏碘液作用1min，水洗；滴加脫色酒精，約30秒，水洗；滴加沙黃復染液，復染1min，水洗，干后鏡檢。革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色；革蘭氏陰性菌呈紅色
3.2 生化特性試驗：用無(wú)菌接種環(huán)鉤取純化后的單個(gè)菌接種到微量發(fā)酵管內, 倒置管放37 ℃溫箱, 觀(guān)察2天。
3.3 藥敏試驗 選擇14 種臨床常見(jiàn)抗菌藥物藥敏片, 在LB瓊脂平板上采用藥敏紙片擴散法操作,37 ℃培養24h 觀(guān)察結果。判定標準為：藥物抑菌圈直徑>20 mm 為高敏，15 ～ 20 mm 為中敏，10 ～15 mm 為低敏，<10 mm 為不敏感。
3.4 病毒的分離鑒定 取發(fā)病雞的肝臟、脾臟、胰腺進(jìn)行研磨, 加PBS稀釋后制成懸液，反復凍融三次；7000轉/分，離心15min；加入1萬(wàn)單位過(guò)濾好的抗生素；加入抗生素后置4℃作用1.5小時(shí)；7000轉/分，離心15min；每胚0.2ml，接種10-11天齡SPF雞胚。收獲胚液進(jìn)行HA檢測，對HA陽(yáng)性樣品進(jìn)行特異性檢測；HA陰性者，將胚液繼續接種雞胚盲傳，至少盲傳至F3代。接種后雞胚繼續放在溫箱中孵育,每隔24 h 觀(guān)察雞胚情況。
4.結果
4.1 病毒分離 HA陰性，也未出現死胚及其他異常現象,所接種雞胚144小時(shí)后仍全部存活, 這樣就排除該雞群發(fā)病由病毒引起的可能性。
4.2 細菌分離 在SS瓊脂平板上分離所得菌落較純, 細菌菌落光滑、細小，在自然光下呈藍灰色或灰白色閃光，整齊均一。革蘭氏染色鏡檢呈陰性細長(cháng)桿菌，沒(méi)有芽孢，有聚集，偶見(jiàn)兩個(gè)或多個(gè)連在一起。
4.3 藥敏試驗
表1 藥敏試驗結果
藥物 不敏 低敏 中敏 高敏 抑菌圈直徑
慶大霉素 √ 20
頭孢呋辛 √ 27
四環(huán)素 √ 10
頭孢曲松 √ 12
多粘菌素B √ 17
卡那霉素 √ 19
諾氟沙星 √ 15
左氟沙星 √ 10
頭孢噻肟 √ 22
青霉素G √ 0
氯霉素 √ 0
阿米卡星 √ 10
復方新諾明 √ 0
5．治療
從藥敏實(shí)驗結果來(lái)看，該菌對頭孢類(lèi)高度敏感，對氨基糖苷類(lèi)藥物和多粘菌素B中度敏感，對頭孢曲松、四環(huán)素、諾氟沙星、阿米卡星、左氟沙星、復方新諾明、氯霉素、青霉素G、復方新諾明等不敏感或耐藥。因此建議該養殖戶(hù)馬上采取如下措施：全群飲水中添加硫酸安普霉素可溶性粉，同時(shí)添加葡萄糖和口服補液鹽，連續飲用4d，并緊急注射頭孢噻呋鈉；用藥后第3天，雞群采食量明顯上升，死亡逐漸減少，精神逐漸恢復正常，病情得到控制。
6.體會(huì )
6.1 肉雞沙門(mén)氏菌病的發(fā)生，多與養殖環(huán)境差相關(guān)，南方黃羽雞飼養多數都在林間飼養，受場(chǎng)地衛生條件和氣候變化影響比較大，還與飼料、飲水不潔有關(guān)，因此要預防本病，必須加強雞場(chǎng)的飼養管理和環(huán)境衛生，保持飼料和飲水的清潔衛生。沙門(mén)氏菌要做好如下防控：1.種源凈化：沙門(mén)氏菌是垂直傳播性疾病，做好種禽的防疫工作尤為重要！種禽的健康直接關(guān)乎肉雞的健康，因此要做好源頭的防控工作。2.流通環(huán)節：禽苗在運輸過(guò)程中也要注意器具、車(chē)輛的消毒衛生，嚴防細菌滋生蔓延！3.養殖環(huán)節：1d齡開(kāi)口藥的預防工作也要做好，選用合適的抗生素進(jìn)行預防，譬如頭孢類(lèi)抗生素等的飲水、注射等；環(huán)境場(chǎng)地的衛生消毒工作；定期的預防性用藥，掌握好疾病發(fā)生規律，定期選擇性投藥。
6.2 合理的用藥：當前沙門(mén)氏菌病的治療由于其在臨床上用藥的不合理性造成菌株耐藥性的不斷增加，現有的廣譜抗生素和抗革蘭氏陰性菌的抗生素的效果越來(lái)越差。本病例在發(fā)病過(guò)程中，曾使用左氟沙星、阿米卡星、強力霉素和氟苯尼考等多種臨床常用藥物，但治療效果均不理想。因此選擇藥物要合理，要選擇療效確切、毒副作用少、使用途徑方便及價(jià)格低廉并且配伍禁忌少的藥物，同時(shí)要注意聯(lián)合用藥，選擇協(xié)同作用強的藥物組合。要密切用藥后群體的反應情況，做好記錄等。
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